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檢測知識
GB/T 21493-2008 大豆磷脂中的磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的測定 檢標(biāo)準(zhǔn)
日期:2022-12-09 10:41:59作者:百檢網(wǎng) 人氣:0

GB/T21493-2008大豆磷脂中的磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的測定檢標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容是什么?百檢網(wǎng)檢測范圍廣泛,可根據(jù)客戶需求選擇合適的檢測標(biāo)準(zhǔn)及項(xiàng)目安排檢測,全國近千家合作實(shí)驗(yàn)室,CMA/CNAS資質(zhì)齊全,可就近安排寄樣檢測。今天百檢網(wǎng)就給大家簡單介紹一下GB/T21493-2008大豆磷脂中的磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的測定檢標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容。

1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了一種采用高效液相色譜法同時測定大豆中磷脂中磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇三種組分含量的方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于含油大豆磷脂、脫油大豆磷脂中磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的測定。本標(biāo)準(zhǔn)不適用于大豆溶血磷脂酰膽堿及大豆溶血磷脂酰乙醇胺的測定。

本標(biāo)準(zhǔn)中磷脂酰膽堿的檢測限為1.21×10-2mg/mL,磷脂酰乙醇胺的檢出限為4.63×10-2mg/mL,磷脂酰肌醇的檢出限為7.36×10-3mg/mL。

2.原理

用多元流動相等度洗脫分配與色譜柱兩相中的磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇組分,在固定相中滯留時

間不同,達(dá)到分離目的。紫外檢測器在線檢測流出組分,與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。

3.試劑

3.1 正己烷:色譜純。

3.2 異丙醇:色譜純。

3.3 水:色譜純。

3.4 冰醋酸:色譜純。

3.5 1%冰醋酸溶液:1mL冰醋酸用色譜純水定容到100mL。

3.6 磷脂酰膽堿:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),純度≥99%。

3.7 磷脂酰乙醇胺:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),純度≥99%。

3.8 磷脂酰肌醇:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),純度≥98%。

3.9 流動相:V(正己烷)+V(異丙醇)+V(1%冰醋酸溶液)=8+8+1。

注:所用的磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇標(biāo)樣來源應(yīng)與所測定的樣品一致,如測定的樣品為大豆磷脂時,上述三種標(biāo)樣應(yīng)來源于大豆。

4.儀器與設(shè)備

4.1 分析天平:精度為0.0001g。

4.2 刻度吸管:0.5mL,1mL,5mL。

4.3 容量瓶:5mL,10mL,100mL。

4.4 量筒:100mL,500mL,1000mL。

4.5 氮?dú)馄?/p>

4.6 液相色譜儀,帶進(jìn)樣系統(tǒng)、紫外檢測器和數(shù)據(jù)處理器。

4.7 液相色譜柱:Si-60柱子,填料粒度為5μm。長度250mm,內(nèi)徑4.6mm。

注:柱子長度與直徑可以依據(jù)實(shí)驗(yàn)條件做相應(yīng)選擇。

5.分析步驟

5.1 液相系統(tǒng)的平衡

進(jìn)樣分析前,用流動相平衡液相系統(tǒng),控制流速為0.5mL/min,保證基線平穩(wěn),樣品的保留時間穩(wěn)定。

5.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

*稱取約20mg磷脂酰膽堿、20mg磷脂酰乙醇胺與10mg磷脂酰肌醇,用V(正己烷)+V(異丙醇)+V(1%冰醋酸溶液)=8+8+1混合溶劑溶解并定容到10mL,配制磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,使溶液中磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇濃度分別為2mg/mL、2mg/mL、1mg/mL。準(zhǔn)確吸取此溶液0.25mL、1.25mL、2.50mL、3.75mL,5.00mL,并用V(正己烷)+V(異丙醇)+V(1%冰醋酸溶液)=8+8+1混合溶劑定容到5mL,使溶液中磷脂酰膽堿的*終濃度為0.1mg/mL~2.0mg/mL,磷脂酰乙醇胺的*終濃度為0.1mg/mL~2.0mg/mL,磷脂酰肌醇的*終濃度為0.05mg/mL~1.0mg/mL,低于-16℃保存?zhèn)溆?保存時注意容器口的密封。

注:假如標(biāo)樣為三氧甲烷或甲醇的溶液,必須將其中的溶劑用氮?dú)庑⌒拇蹈?再用流動相溶解定容。

5.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作

分別取不同濃度的磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇混合標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL注入液相色譜中。以樣品各組分濃度為橫坐標(biāo),各組分峰面積為縱坐標(biāo),分別繪制磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇三種組分的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

5.4 樣品前處理

測試樣品應(yīng)避光放在密閉和防潮的容器內(nèi),樣品在使用前需充分混勻。

依據(jù)樣品中磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇含量,*稱取樣品15mg~50mg,用V(正己烷)+V(異丙醇)+V(1%冰醋酸溶液)=8+8+1混合溶劑溶解并定容至5mL,低于-16℃保存?zhèn)溆?保存時注意容器口的密封。

5.5 測定

5.5.1 色譜條件:Si60柱子,長250mm,內(nèi)徑4.6mm,填充物粒度5μm,流動相流速1mL/min,柱溫30℃,紫外檢測波長205mm。如果采用不同型號的Si柱,可通過調(diào)整流速,達(dá)到*佳工作狀態(tài)。

5.5.2 進(jìn)樣:準(zhǔn)確取經(jīng)0.45μm微孔過濾的待測液10μL,注入液相色譜儀,比較待測液與標(biāo)準(zhǔn)樣品的高效液相色譜(HPLC)圖譜,取與標(biāo)準(zhǔn)樣品HPLC圖譜中磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰膽堿相同時間的峰面積與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線比較定量。對同一樣品至少進(jìn)行兩次測定。

6.結(jié)果計算

試樣中磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷酯酰肌醇的含量以各組分的質(zhì)量與試樣原有質(zhì)量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示,其計算公式為:

X=c×5/m×100

X——樣品中磷脂酰膽堿(或磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇)的含量,單位為克每一百克(g/100g);

c——由磷脂酰膽堿(或磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上查出的試樣測定液中磷脂酰膽堿(或磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇)的濃度,單位為毫克每毫升(mg/mL);

5——樣品的定容體積,單位為毫升(mL);

m——樣品的總質(zhì)量,單位為毫克(mg)。

如果兩次測定的結(jié)果符合第7章中給定的重復(fù)性要求,則取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果,如果不符合重復(fù)性要求,需對同一樣品重新進(jìn)行兩次測定。

7.重復(fù)性要求

同一個分析者使用同樣的方法在同一個實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用同樣儀器設(shè)備對同一試樣連續(xù)進(jìn)行兩次測定的結(jié)果相對偏差不得大于5%。

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